中药材-百蕊草

百蕊草 Bairuicao

THESII    HERBA

本品为檀香科植物百蕊草Thesium chinense Turcz.或其变种长梗百蕊草 Thesium chinense  Turcz.var.longipedunculatum  Chu 的干燥全草。夏、秋二季采挖全草，除 去杂质、泥土，干燥。

【性状】 本品长20～40cm 。根呈圆锥形，直径0.1～0.4cm;  表面灰黄色，具 纵皱纹及支根。茎簇生，纤细，淡绿色或灰绿色，有细纵棱，质脆，断面中空。叶 互生，线状披针形，长1.5～3.5cm,  宽0.5～1.5mm,  全缘，暗绿色。花单生于叶 腋。坚果类球形，直径约2mm,  表面灰绿色，有网状皱纹，顶端有花被残基，基 部有宿存小苞片。气微，味淡。

【鉴别】 (1)本品粉末黄绿色或浅黄棕色。叶表皮细胞垂周壁呈波状弯曲，

气孔为平轴式。叶肉细胞中含草酸钙方晶。石细胞呈类椭圆形、类长方形或不规则 多边形，淡黄色，壁厚，孔沟明显。纤维呈长梭形，具有稀疏单纹孔，壁厚。导管 为网纹导管、螺纹导管及环纹导管。

(2)百蕊草 取本品粉末1g,   置具塞锥形瓶中，加乙醚20ml,  超声处理5分 钟，滤过，弃去滤液，挥干，残渣加甲醇50ml, 超声处理20分钟，滤过，取滤 液，作为供试品溶液。另取百蕊草对照药材1g,  同法制成对照药材溶液。再取百  蕊草素 I 对照品，加甲醇制成每1ml 含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl, 分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃烘约5分钟，置紫外光灯(365nm)  下  检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的荧光斑点。

( 3)DNA    条形码分子鉴定法或【特征图谱】。

DNA 条形码分子鉴定法。

模板DNA  提取  取本品适量，依次用75%乙醇1ml、无菌超纯水1ml清洗， 吸干表面水分，研磨成粉末。取20mg, 置1.5ml离心管中，用植物基因组 DNA 提 取试剂盒提取，作为供试品溶液。置-20℃保存备用。

PCR  反应  鉴别引物：5'ATGCGATACTTGGTGTGAAT3′   和 5'GACGCTTCTCC-AGACTACAAT3' 。PCR反应体系：在200 μl 离心管中进行，反应总体积为25 μl,  反应体系包括2× PCR  Mix   12.5μl,鉴别引物(10μmol/L)  各0.5 μl,   模板1 μl,  无  菌超纯水10.5μl。将离心管置PCR 仪 ，PCR 反应参数：94℃预变性4分钟，循环 反应40次(94℃ 30秒，56℃ 30秒，72℃ 45秒),72℃延伸10分钟。另取无菌 超纯水，同法上述 PCR 反应操作，作为空白对照。

电泳检测  照琼脂糖凝胶电泳法(《中国药典》2020年版四部通则0541),胶 浓度为1.5%,胶中加入核酸凝胶染色剂；PCR  反应液上样量为8μl,DNA    分子量 标记上样量为5μl(0.5μg/μl) 。  电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射 仪上检视。

系统适用性  空白对照PCR 反应液在凝胶电泳图谱400～500bp 应无条带检 出；供试品PCR 反应液在凝胶电泳图谱400～500bp 应有条带检出。应同时满足以上条件。

测序  照 DNA 测序技术指导原则(《中国药典》2020年版四部通则9108), 使用PCR 扩增引物作为测序引物，对目的条带进行双向测序，测序原理为Sanger  测序法。

DNA 条形码序列获得 序列拼接：对双向测序峰图进行序列拼接，去除引 物区。为确保DNA 条形码序列的可靠性，序列方向应与PCR 扩增正向引物方向 一致 。

结果判定  将获得的序列与中药分子序列标准平台(网址：www.herbsdna.  com)  标准数据库中百蕊草Thesium chinense Turcz.或其变种长梗百蕊草Thesium chinense     Turcz.var.longipedunculatum      Chu      ITS2序列比对，采用BLAST   法 ，Identities   值应为100%。【特征图谱】百蕊草  照高效液相色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验  除检测波长为330nm 外，其余同【含量测 定 】 项 。

参照物溶液的制备  取百蕊草对照药材约1g, 置具塞锥形瓶中，加入50%乙 醇溶液25ml,  超声处理45分钟，取出，放冷，滤过，滤液作为对照药材参照物溶 液。另取【含量测定】项下的对照品溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备 取【含量测定】项下的供试品溶液，即得。

测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5μl, 注入液相色谱仪，测 定 ， 即得 。

供试品色谱中应呈现5个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的5个特征峰 保留时间相对应。与百蕊草素I 对照品参照物峰相对应的峰为S 峰，计算各特征 峰 与S 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%之内。规定值为 0.195(峰1)、0.219(峰2)、0.380(峰3)、1.158(峰5)。

对照特征图谱

峰1:3-0-对羟基肉桂酰奎宁酸；峰2:5-O- 阿魏酰奎宁酸；峰3:4-0-阿魏酰奎宁酸；

峰 4(S):    百蕊草素 I;     峰5:山柰酚-3-0-(2"-0- α-鼠李糖-6"-O- 丙二酰)-β-葡萄糖苷

参考色谱柱：Waters  ACQUITY  UPLC  BEH  Shield  RP₁₈(150mm×2.1mm,1.7μm)

【检查】水分 不得过12.0%(《中国药典》2020年版四部通则0832第二法)。

【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2020年版四部通则2201)项 下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于14.0%。

【含量测定】百蕊草  照高效液相色谱法(《中国药典》2020年版四部通则 0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流 动相A,  以0 . 2%甲酸溶液为流动相B;   按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每 分钟0.4ml; 检测波长为270nm 。理论板数按百蕊草素I 峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备  取百蕊草素I 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含0.3mg 的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  取本品粉末(过四号筛)约1g, 精密称定，置具塞锥形  瓶中，精密加入50%乙醇25ml,  称定重量，超声处理(功率500W,  频率40kHz)   45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2 μl,   注入液相色谱仪，测 定，即得。

本品按干燥品计算，含百蕊草素 I(C₁₆H₁₈O₉)  不得少于0.20%。

【性味与归经】辛、苦、涩，凉。归肺经。

【功能与主治 】清热解毒，止咳化痰。用于肺炎，气管炎，急慢性咽喉炎， 鼻炎，急性膀胱炎，感冒，中暑，淋巴结核。

【用法与用量】 15～30g。

【贮藏】 置通风干燥处。